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王紅
（長春市園林科學研究所）

　　摘要：以抗寒月季帶腋芽莖段為外植體。結果表明：在MS+6-BA1.0~3.0mg/l+NAA0.10mg/l培養(yǎng)基上進行起始培養(yǎng)，其腋芽生長到2~3cm時轉接到MS+6-BA2.0-3.0mg/l+NAA0.1mg/l的培養(yǎng)基上進行繼代增殖培養(yǎng),30天其增殖倍數(shù)在3~4倍以上,且長成的芽苗比較粗壯;增殖后的芽苗在1/2MS+NAA0.5~1.0mg/l或IBA0.5~0.8mg/l的培養(yǎng)基上培養(yǎng),根系生長良好,30天小苗發(fā)根率達90%以上,經(jīng)煉苗后移栽在以草碳和珍珠巖(體積比1:1)基質中,成活率達85%以上,當小苗長到10cm左右移植于田間栽培,60~90天后可陸續(xù)現(xiàn)蕾開花.

　　關鍵詞:抗寒月季；組織培養(yǎng)；快速繁殖；帶腋芽莖段

　　月季是薔薇屬的木本花卉,有“花中皇后”的美譽,深受人們的喜愛.為我國十大名花之一,在我國有30多個城市將其選為市花。抗寒月季是近幾年選育出來的能夠適應北方寒冷氣候特點的新的月季品種,以其花大,色艷、花期長被北方園林綠化彩化中廣泛應用，但由于其繁殖以扦插繁殖為主，繁殖速度慢，滿足不了生產(chǎn)發(fā)展的需要，而組織培養(yǎng)可在短期內(nèi)獲得大量的優(yōu)良種苗，為此，我們于2003~2006年開展了抗寒月季組培快繁的研究工作。

　　1　材料與方法

　　1.1　材料

　　試驗所用的材料為長春市園林科學研究所抗寒月季基地抗寒月季新品種。

　　1.2　方法

　　1．2．1　外植體的準備

　　取生長健壯優(yōu)良母株上帶有腋芽的嫩莖，摘除葉片和嫩刺，用自來水沖洗干凈后，用浸有75%的酒精棉球擦拭表面5~10S，剪成3~5cm左右的莖段，在超凈工作臺上，用0.1%升汞溶液消毒10~12分，無菌水沖洗3~5次，再用無菌濾紙吸干表面水分，切成帶有1個或2個腋芽的莖段接種到培養(yǎng)基中。

　　1．2．2　腋芽的分化與增殖

　　把外植體分別接種于添加6-BA和NAA的MS培養(yǎng)基上進行起始培養(yǎng)，誘導腋芽萌發(fā)建立無菌快速繁殖無性系，再將無菌小苗剪切成1~2cm左右的小段接種到添加不同6-BA和NAA的MS培養(yǎng)基中進行繼代增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)一定時間后對小苗的增殖與生長情況進行觀察統(tǒng)計分析，培養(yǎng)基含30g/l糖、8g/l瓊脂、pH值5.8~6.5、培養(yǎng)溫度（25+-3），每天光照為11~12小時，光照強度1000~1500LX。

　　1．2．3　生根與移栽

　　將增殖后長勢旺盛、節(jié)間紳長適度的無根小苗轉接到1/2MS培養(yǎng)基中誘導生根，30天后觀察生根情況。

　　生根后的試管苗在常溫下煉苗5~7天，移栽到草碳+珍珠巖（體積比為1∶1）的基質中，待成活后小苗高達10cm左右移到田間種植。

　　2　結果與討論

　　2．1　腋芽分化

　　將外植體接種到MS+2.0 mg/l6-BA+0.1mg/lNAA的培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天后，大部分外植體開始萌動，10天腋芽膨大明顯，隨后長出嫩芽形成無根芽從。

　　為選擇出不同質量濃度6-BA對誘導腋芽分化的影響，以MS為基本培養(yǎng)基配制7種附加不同質量濃度（分別為0.1  0.5  1.0  1.5  2.0  3.0  4.0）的6-BA與0.1mg/lNAA配組的腋芽誘導培養(yǎng)基,每組培養(yǎng)基接種40個外植體,培養(yǎng)40天觀察其腋芽分化情況（見表1）。

　　表1表明,月季腋芽分化率與培養(yǎng)基中6-BA質量濃度呈拋物線關系,6-BA由0.1增加至3.0時腋芽分化率明顯提高,以3.0為最高,腋芽分化率達77.5%;當6-BA的質量繼續(xù)增加時,其腋芽分化率則明顯下降;6-BA質量濃度為0.1時其腋芽分化率最低,僅為7.5%;6-BA質量濃度為5.0時,其腋芽分化率只為15%,可見,培養(yǎng)基中6-BA質量濃度為1.5~3.0時有利于誘導腋芽分化,尤其以2.0~3.0時為最佳。

　　2.2　繼代增殖培養(yǎng)

　　取自同一種培養(yǎng)基上長勢、大小一致的繼代培養(yǎng)芽和莖段，同時接種到不同質量濃度的6-BA、NAA的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30天后進行觀察并統(tǒng)計結果（見表2）。

　　由表 2可以看出，在NAA質量濃度相同而6-BA質量濃度不同的處理中，隨著6-BA濃度的升高（1.5~3.0）芽苗的增殖倍數(shù)也相應提高，NAA為0.05~0.1、6-BA為3.0的處理芽苗增殖倍數(shù)高達6.6~6.8倍；可見，培養(yǎng)基中6-BA質量濃度為3.0、NAA質量濃度為0.05時為最佳的誘導腋芽分化的處理組合。

　　2．3　生根培養(yǎng)

　　無菌芽苗在分化與增殖培養(yǎng)基中只誘導地上部分，既不斷地分枝增殖，曾多次出現(xiàn)現(xiàn)蕾、開花現(xiàn)象，但均不易生根。因此，將原來培養(yǎng)基中的大量元素減半（既1/2MS），并去除BA進行根的誘導。結果在無菌苗根的誘導過程中，生長素的種類和使用濃度起決定性作用，為此對不同種類的生長素NAA、IBA、A、IAA的根效應作對比試驗，結果表明，NAA、IBA對抗寒月季無菌苗誘根效應明顯優(yōu)于IAA，但兩者之間差異不明顯，用IAA進行根的誘導，芽苗基部長出較多的愈傷組織，發(fā)根率低，且發(fā)根量少，移栽成活率下降，這可能是因為生長過多的愈傷組織影響根系維管束的發(fā)育所致，為為了解NAA和IBA的適宜質量濃度，進行了NAA和IBA的質量濃度試驗，分別設置0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、1.0、1.5等7種質量濃度進行比較，培養(yǎng)30天后觀察根系生長情況，表3表明，以1/2MS（大量元素用量減半）+NAA和1/2MS（大量元素用量減半）+IBA培養(yǎng)基對月季根的誘導效果均較為理想，而且濃度都在0.3-0.75mg/l范圍內(nèi)最為適合，但以NAA為最佳。其中NAA生根率最高達92%，移栽成活率高達89%，IBA的生根率也高達90%，移栽成活率達87%。

　　將小苗接種到上述培養(yǎng)基中10天后其基部傷口基本愈合，18天則長出許多小白根，培養(yǎng)30天發(fā)根率均達90%以上，且長有3條以上，長度達2.0cm以上白根的占80%以上。

　　2．4　煉苗移栽

　　在生根培養(yǎng)基中，無菌苗生長迅速，植株逐漸健壯起來，其根系生長尤為迅速，在多數(shù)根系長達1.0cm，其根尖仍保持旺盛生長狀態(tài)，此時即可進入過度栽培（煉苗）階段，移栽前先將瓶苗移出恒溫培養(yǎng)室，在常溫下置于較強散射光中煉苗7天，打開瓶蓋后繼續(xù)煉苗2~7天，然后小心取出放入清水中清洗干凈，注意少傷根，移栽到以草碳土+珍珠巖（體積比1∶1）的基質中，澆透水并覆蓋塑料膜，保持相對濕度85~90%，溫度15~25℃，10天后逐漸揭膜煉苗，15~20天可將塑料膜全部揭除，并澆施營養(yǎng)液補充營養(yǎng)，其成活率一般可達70%以上，待小苗長至10~15cm左右時，就可移植到田間定植。

　　參考文獻

　　［1］李正平.月季試管繁殖和移栽中幾個因素的研究［J］.園藝學報，1988，15（2）：131